如何进行药物的含量测定方法与验证?

2020-05-09 12:21:02

药物的含量:指药物中所含主成分的量,是评价药物质量的重要标准。




可供药物含量测定的分析方法:




(1)容量分析法


①优点:操作简便,结果准确,方法耐用性高。


②缺点:方法缺乏专属性。

③适用:适用于对结果准确度与精密度要求较高的样品的测定。




(2)光谱分析法

①优点:简便,快速,灵敏度高,并具有-一定的准确度。②缺点:方法专属性稍差。

③适用:适用于对灵敏度要求较高、样本量较大的分析项目。





(3)色谱分析法

①优点:高灵敏度与高专属性,并具有一定的准确度。


②缺点:结果计算需要对照品。

③适用:适用于对方法的专属性与灵敏度要求较高的复杂样品的含量测定。3、为确保分析结果的可靠性,要求分析方法应准确、稳定、耐用。





•方法选择中的供试品因素


-化学原料药的含量测定首选容量分析法


-药物制剂的含量测定首选色谱分析法


-药物制剂的定量检查首选光谱分析法


•含量测定方法须准确、稳定、耐用




第一节 定量分析方法的分类与特点




一  容量分析法:




•基本术语



-滴定:将滴定剂通过滴管滴入待测溶液中的过程


-滴定剂:浓度准确已知的试样溶液


-指示剂:滴定分析中能发生颜色改变而指示终点的试 剂


-滴定终点:滴定分析中指示剂发生颜色改变的那一点 (实际)


-化学计量点:滴定剂与待测溶液按化学计量关系反应 完全的那一点(理论)


-滴定误差:滴定终点与化学计量点不一致产生的误差




•特点


-方法简便易行


-方法耐用性高


-测定结果准确


-方法专属性差




•适用范围:较多用于化学原料药物的含量 测定


•有关计算:




-滴定度:


每1 ml某摩尔浓度的滴定液所相当的 被测药物的重量。中国药典用mg表示


-滴定度的计算





-含量的计算


/直接滴定法:







/所配制滴定液浓度与规定浓度不一致时:








/间接滴定法:生成物滴定法


/简接滴定法:剩余量滴定法





二、光谱分析法:





•紫外-可见分光光度法(200〜400〜760nm)




-朗伯-比耳定律





-E:单位液层厚度时的吸收度。有两种表示法:


/摩尔吸收系数:在一定波长下,溶液浓度为1mol/L, 厚度为1cm时的吸收度。用e表示。


/百分吸收系数:在一定波长下,溶液浓度为1%


(W/V),厚度为1cm时的吸收度。用E比表示。




-特点与适用范围


/简便易行


/灵敏度高,可达10-4g/ml〜10-7g/ml。


/准确度较高,相对误差为2%〜5%。


/专属性较差


/较少应用于原料药含量测定,多用于制剂的定量检 查。




-仪器校正与检定




/波长:常用仪器中制:丁的486.02nm与656.10nm谱 线校正,或用钦玻璃的尖锐吸收峰。


/吸光度的准确度:与规定的吸收系数比较。


/杂散光的检查


/对溶剂的要求:截止波长


/测定法:波长扫描与吸光度读数


 


-含量测定方法


/对照品比较法




/吸收系数法







/计算分光光度法


/比色法




•荧光分析法




-特点与适用范围


/灵敏度高,可达 1010g/mH1012g/ml.


/浓度太大会有“自熄灭”作用,故适用于低浓度的 溶液。


/干扰因素多,须做空白试验。


/取样少,方法快速。衍生化试剂提高了适用范围




-干扰的排除


/溶剂:进一步纯化溶剂,空白试验


/溶液:适当的浓度,减少杂质,降低溶氧,调节pH


/玻璃量器:高洁净度


/温度:稳定的温度




-含量测定


/相对定量方法测定


/线性范围较窄






式中:Ci为供试品溶液的浓度,Cr为对照品溶液的浓度,Ri为供试品溶液 的读数,Rib为供试品溶液试剂空白的读数,Rr为对照品溶液的读数,Rrb 为对照品溶液试剂空白的读数。




三、色谱分析法:




・特点与适用范围


-高灵敏度


-高专属性


-高效能与高速度


-适用于药物制剂,尤其复方制剂的含量测定。




•分类


-依据分离原理:吸附色谱、分配色谱、离子交换色谱、 分子排阻色潜等


-依据分离方式:纸色谱法,薄层色谱法,柱色谱法, 气相色谱法,高效液相色谱法等




•高效液相色谱法


-药品标准对HPLC方法改变的要求


-对仪器的一般要求:


-色谱柱:填料,孔径与粒径,柱直径,温度,pH等


-检测器:通用型检测器与选择性检测器,对流动相 的要亲


-流动相:反相系统与正相系统


 



-系统适用性试验


-色谱柱的理论塔板数



・色谱峰的分离度



・色谱系统的重复性:




・色谱峰的拖尾因子




d1为极大峰至峰前沿之间的距离。T应在0.95-1.05之间。



-测定法:


1、外标法:一点法;两点法;工作曲线法


2、内标法




•气相色谱法




-检测器、固定液及特殊指定的色谱柱材料不能更换


-对仪器的一般要求


-载气


-色谱柱填料,柱管材质,固定液


-检测器种类,使用温度


-进样方式


-系统适用性试验


-测定法:多釆用内标法




第二节 样品分析的前处理方法




样品分析的前处理方法




•在分析含金属或卤素、氮、硫、磷等元素 的有机药物前,需进行适当的药品前处理。


•分类


-不经有机破坏的前处理方法


-经有机破坏的前处理方法


样品分析的前处理方法




•不经有机破坏的前处理方法




-直接测定法——含金属或C-M不牢固的有机金属药物


•配位滴定法


•氧化还原滴定法




经水解后测定法一卤素联脂肪碳链(溶于适当溶剂再水解)


-碱水解后测定法


•酸水解后测定法




-经氧化还原后测定法——卤素联芳环牢固(一般用于测碘)




•经有机破坏的前处理方法




-湿法破坏


•硫酸-硫酸盐法——凯氏定氮法


•硝酸-高氯酸法


•硝酸-硫酸法


•其它湿法




-干法破坏


•高温炽灼法


•氧瓶燃烧分解后测定法




-硫酸-硫酸盐法——凯氏定氮法




•将含氮药物与硫酸在凯氏定氮烧瓶中共热,药物分子 中有机结构被氧化分解(亦称“消解”或“消化”) 成二氧化碳和水,有机结合的氮则转变为无机氮,并 写过量的硫發结合另寵磋氢程及硫發铉,经氢童化钠 碱化后释放出氮气,并随水蒸气馅出,用祖酸渣液或 定墨的酸滴定液吸收后,再用酸或碱滴定疲滴是。




-高温炽灼法




-将含待测元素的有机药物经高温灼烧灰化,使有机结 构分解而待测元素转化为无机元素或可溶性无机盐, 以供分析。根据分析对象与目的不同,常加无水碳酸 钙、硝酸镁、氢氧化钙、氧化锌等辅助灰化。




-氧瓶燃烧法




第三节药品质量标准分析方法验证




药品质量标准分析方法验证




•方法验证的目的


•需验证的分析项目:鉴别试验;杂质定量 或限度检查;含量测定等


•验证内容:准确度;精密度;专属性;检 测限/定量限;线性及范围;耐用性等




1、准确度




•含量测定方法的准确度




-原料药的含量测定


-制剂的含量测定




•杂质定量测定方法的准确度




-使用杂质对照品


-缺少杂质对照品


•数据要求




2、精密度




•标准偏差(SD)与相对标准偏差(RSD)




•验证内容:重复性/中间精密度/重现性




•数据要求




3、专属性




•鉴别反应


•含量测定和杂质测定


-阴性对照


-阳性对照


-纯度测试




4、检测限/定量限




•检测限常用方法


-目视法:非仪器法


-信噪比法:色谱法


-标准偏差法:光谱法




•定量限:信噪比要求不同




•数据要求




5、线性及范围




•线性


-回归方程


-相关系数




•范围


-原料药和制剂含量测定


-制剂含量均匀度检查


-溶出度或释放度中的溶出量测定


-特殊元素含量测定


-杂质测定




六、耐用性




•耐用性


•典型的变动因素


-被测溶液


-环境因素


-液相色谱法中典型因素


-气相色谱法中典型因素




7、验证内容的选择




•非定量分析方法


•定量分析方法


•微量定量分析方法





①已有重现 性验证, 不需验证 卷间精密


②如一种方 法不够专 属,可用 其他分析 方法予以 补充


③视具体情 况予以验证




8、药品质量标准中分析方法验证示例




•阿司匹林及其片剂的药品质量标准


-鉴别:


•化学鉴别法


•红外光谱法




-检查


•溶液的澄清度


•游离水杨酸


•溶出度




-含量测定


•酸碱滴定法


•高效液相色谱法


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