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如何进行药物的含量测定方法与验证?

发布时间:2021-08-28 21:28:03

药物的含量:指药物中所含主成分的量,是评价药物质量的重要标准。

 

 

 

可供药物含量测定的分析方法:

 

 

 

(1)容量分析法

 

①优点:操作简便,结果准确,方法耐用性高。

 

②缺点:方法缺乏专属性。

③适用:适用于对结果准确度与精密度要求较高的样品的测定。

 

 

 

(2)光谱分析法

①优点:简便,快速,灵敏度高,并具有-一定的准确度。②缺点:方法专属性稍差。

③适用:适用于对灵敏度要求较高、样本量较大的分析项目。

 

 

 

 

(3)色谱分析法

①优点:高灵敏度与高专属性,并具有一定的准确度。

 

②缺点:结果计算需要对照品。

③适用:适用于对方法的专属性与灵敏度要求较高的复杂样品的含量测定。3、为确保分析结果的可靠性,要求分析方法应准确、稳定、耐用。

 

 

 

 

•方法选择中的供试品因素

 

-化学原料药的含量测定首选容量分析法

 

-药物制剂的含量测定首选色谱分析法

 

-药物制剂的定量检查首选光谱分析法

 

•含量测定方法须准确、稳定、耐用

 

 

 

第一节 定量分析方法的分类与特点

 

 

 

一  容量分析法:

 

 

 

•基本术语

 

 

-滴定:将滴定剂通过滴管滴入待测溶液中的过程

 

-滴定剂:浓度准确已知的试样溶液

 

-指示剂:滴定分析中能发生颜色改变而指示终点的试 剂

 

-滴定终点:滴定分析中指示剂发生颜色改变的那一点 (实际)

 

-化学计量点:滴定剂与待测溶液按化学计量关系反应 完全的那一点(理论)

 

-滴定误差:滴定终点与化学计量点不一致产生的误差

 

 

 

•特点

 

-方法简便易行

 

-方法耐用性高

 

-测定结果准确

 

-方法专属性差

 

 

 

•适用范围:较多用于化学原料药物的含量 测定

 

•有关计算:

 

 

 

-滴定度:

 

每1 ml某摩尔浓度的滴定液所相当的 被测药物的重量。中国药典用mg表示

 

-滴定度的计算

 

 

 

 

-含量的计算

 

/直接滴定法:

 

 

 

 

 

 

/所配制滴定液浓度与规定浓度不一致时:

 

 

 

 

 

 

 

/间接滴定法:生成物滴定法

 

/简接滴定法:剩余量滴定法

 

 

 

 

二、光谱分析法:

 

 

 

 

•紫外-可见分光光度法(200〜400〜760nm)

 

 

 

-朗伯-比耳定律

 

 

 

 

-E:单位液层厚度时的吸收度。有两种表示法:

 

/摩尔吸收系数:在一定波长下,溶液浓度为1mol/L, 厚度为1cm时的吸收度。用e表示。

 

/百分吸收系数:在一定波长下,溶液浓度为1%

 

(W/V),厚度为1cm时的吸收度。用E比表示。

 

 

 

-特点与适用范围

 

/简便易行

 

/灵敏度高,可达10-4g/ml〜10-7g/ml。

 

/准确度较高,相对误差为2%〜5%。

 

/专属性较差

 

/较少应用于原料药含量测定,多用于制剂的定量检 查。

 

 

 

-仪器校正与检定

 

 

 

/波长:常用仪器中制:丁的486.02nm与656.10nm谱 线校正,或用钦玻璃的尖锐吸收峰。

 

/吸光度的准确度:与规定的吸收系数比较。

 

/杂散光的检查

 

/对溶剂的要求:截止波长

 

/测定法:波长扫描与吸光度读数

 

 

 

-含量测定方法

 

/对照品比较法

 

 

 

/吸收系数法

 

 

 

 

 

 

/计算分光光度法

 

/比色法

 

 

 

•荧光分析法

 

 

 

-特点与适用范围

 

/灵敏度高,可达 1010g/mH1012g/ml.

 

/浓度太大会有“自熄灭”作用,故适用于低浓度的 溶液。

 

/干扰因素多,须做空白试验。

 

/取样少,方法快速。衍生化试剂提高了适用范围

 

 

 

-干扰的排除

 

/溶剂:进一步纯化溶剂,空白试验

 

/溶液:适当的浓度,减少杂质,降低溶氧,调节pH

 

/玻璃量器:高洁净度

 

/温度:稳定的温度

 

 

 

-含量测定

 

/相对定量方法测定

 

/线性范围较窄

 

 

 

 

 

式中:Ci为供试品溶液的浓度,Cr为对照品溶液的浓度,Ri为供试品溶液 的读数,Rib为供试品溶液试剂空白的读数,Rr为对照品溶液的读数,Rrb 为对照品溶液试剂空白的读数。

 

 

 

三、色谱分析法:

 

 

 

・特点与适用范围

 

-高灵敏度

 

-高专属性

 

-高效能与高速度

 

-适用于药物制剂,尤其复方制剂的含量测定。

 

 

 

•分类

 

-依据分离原理:吸附色谱、分配色谱、离子交换色谱、 分子排阻色潜等

 

-依据分离方式:纸色谱法,薄层色谱法,柱色谱法, 气相色谱法,高效液相色谱法等

 

 

 

•高效液相色谱法

 

-药品标准对HPLC方法改变的要求

 

-对仪器的一般要求:

 

-色谱柱:填料,孔径与粒径,柱直径,温度,pH等

 

-检测器:通用型检测器与选择性检测器,对流动相 的要亲

 

-流动相:反相系统与正相系统

 

 

 

 

-系统适用性试验

 

-色谱柱的理论塔板数

 

 

・色谱峰的分离度

 

 

・色谱系统的重复性:

 

 

 

・色谱峰的拖尾因子

 

 

 

d1为极大峰至峰前沿之间的距离。T应在0.95-1.05之间。

 

 

-测定法:

 

1、外标法:一点法;两点法;工作曲线法

 

2、内标法

 

 

 

•气相色谱法

 

 

 

-检测器、固定液及特殊指定的色谱柱材料不能更换

 

-对仪器的一般要求

 

-载气

 

-色谱柱填料,柱管材质,固定液

 

-检测器种类,使用温度

 

-进样方式

 

-系统适用性试验

 

-测定法:多釆用内标法

 

 

 

第二节 样品分析的前处理方法

 

 

 

样品分析的前处理方法

 

 

 

•在分析含金属或卤素、氮、硫、磷等元素 的有机药物前,需进行适当的药品前处理。

 

•分类

 

-不经有机破坏的前处理方法

 

-经有机破坏的前处理方法

 

样品分析的前处理方法

 

 

 

•不经有机破坏的前处理方法

 

 

 

-直接测定法——含金属或C-M不牢固的有机金属药物

 

•配位滴定法

 

•氧化还原滴定法

 

 

 

经水解后测定法一卤素联脂肪碳链(溶于适当溶剂再水解)

 

-碱水解后测定法

 

•酸水解后测定法

 

 

 

-经氧化还原后测定法——卤素联芳环牢固(一般用于测碘)

 

 

 

•经有机破坏的前处理方法

 

 

 

-湿法破坏

 

•硫酸-硫酸盐法——凯氏定氮法

 

•硝酸-高氯酸法

 

•硝酸-硫酸法

 

•其它湿法

 

 

 

-干法破坏

 

•高温炽灼法

 

•氧瓶燃烧分解后测定法

 

 

 

-硫酸-硫酸盐法——凯氏定氮法

 

 

 

•将含氮药物与硫酸在凯氏定氮烧瓶中共热,药物分子 中有机结构被氧化分解(亦称“消解”或“消化”) 成二氧化碳和水,有机结合的氮则转变为无机氮,并 写过量的硫發结合另寵磋氢程及硫發铉,经氢童化钠 碱化后释放出氮气,并随水蒸气馅出,用祖酸渣液或 定墨的酸滴定液吸收后,再用酸或碱滴定疲滴是。

 

 

 

-高温炽灼法

 

 

 

-将含待测元素的有机药物经高温灼烧灰化,使有机结 构分解而待测元素转化为无机元素或可溶性无机盐, 以供分析。根据分析对象与目的不同,常加无水碳酸 钙、硝酸镁、氢氧化钙、氧化锌等辅助灰化。

 

 

 

-氧瓶燃烧法

 

 

 

第三节药品质量标准分析方法验证

 

 

 

药品质量标准分析方法验证

 

 

 

•方法验证的目的

 

•需验证的分析项目:鉴别试验;杂质定量 或限度检查;含量测定等

 

•验证内容:准确度;精密度;专属性;检 测限/定量限;线性及范围;耐用性等

 

 

 

1、准确度

 

 

 

•含量测定方法的准确度

 

 

 

-原料药的含量测定

 

-制剂的含量测定

 

 

 

•杂质定量测定方法的准确度

 

 

 

-使用杂质对照品

 

-缺少杂质对照品

 

•数据要求

 

 

 

2、精密度

 

 

 

•标准偏差(SD)与相对标准偏差(RSD)

 

 

 

•验证内容:重复性/中间精密度/重现性

 

 

 

•数据要求

 

 

 

3、专属性

 

 

 

•鉴别反应

 

•含量测定和杂质测定

 

-阴性对照

 

-阳性对照

 

-纯度测试

 

 

 

4、检测限/定量限

 

 

 

•检测限常用方法

 

-目视法:非仪器法

 

-信噪比法:色谱法

 

-标准偏差法:光谱法

 

 

 

•定量限:信噪比要求不同

 

 

 

•数据要求

 

 

 

5、线性及范围

 

 

 

•线性

 

-回归方程

 

-相关系数

 

 

 

•范围

 

-原料药和制剂含量测定

 

-制剂含量均匀度检查

 

-溶出度或释放度中的溶出量测定

 

-特殊元素含量测定

 

-杂质测定

 

 

 

六、耐用性

 

 

 

•耐用性

 

•典型的变动因素

 

-被测溶液

 

-环境因素

 

-液相色谱法中典型因素

 

-气相色谱法中典型因素

 

 

 

7、验证内容的选择

 

 

 

•非定量分析方法

 

•定量分析方法

 

•微量定量分析方法

 

 

 

 

①已有重现 性验证, 不需验证 卷间精密

 

②如一种方 法不够专 属,可用 其他分析 方法予以 补充

 

③视具体情 况予以验证

 

 

 

8、药品质量标准中分析方法验证示例

 

 

 

•阿司匹林及其片剂的药品质量标准

 

-鉴别:

 

•化学鉴别法

 

•红外光谱法

 

 

 

-检查

 

•溶液的澄清度

 

•游离水杨酸

 

•溶出度

 

 

 

-含量测定

 

•酸碱滴定法

 

•高效液相色谱法

 

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